اثربخشی مزوتراپی در جوانسازی صورت

رنگ آمیزی هیستوشیمیایی

نمونه ها برای رنگ آمیزی استاندارد هماتوکسیلین و ائوزین (H&E)، Verhoeff-van Gieson (الیاف الاستیک) (HT25A؛ Sigma-Aldrich Corp., St Louis, MO, USA) و رنگ آمیزی قرمز picrosirius (Direct Red 80; Sigma-Aldrich Corp) رنگ آمیزی شدند. ) برای کلاژن تازه سنتز شده.

اندازه گیری های بافت شناسی

اندازه‌گیری‌های بافت‌شناسی بر روی مقاطع رنگ‌آمیزی استاندارد H&E با استفاده از نرم‌افزار مبتنی بر کامپیوتر (Image-Pro Plus 6.1; Media Cybernetics, Inc., Silver Spring, MD, USA) انجام شد. ضخامت اپیدرم از بالای لایه سلولی دانه ای تا محل اتصال درمو-اپیدرم اندازه گیری شد. پنج اندازه گیری برای هر بخش محاسبه شد.

رنگ آمیزی ایمونوهیستوشیمی

ما انواع کلاژن I و III و همچنین الاستین کل را با استفاده از تکنیک ایمونوپرواکسیداز ارزیابی کردیم. پس از بازیابی آنتی ژن به روش مایکروویو در سیترات سدیم 0.1 مولار (pH 6.0) به مدت پنج دقیقه، مکان های غیر اختصاصی با استفاده از 5٪ سرم طبیعی بز (NGS)، 1٪ آلبومین سرم گاوی (BSA) و 0.02٪ Triton X-100 مسدود شد. (TX-100) در سالین بافر فسفات (PBS). بافت ها در دمای 4 درجه سانتیگراد یک شبه با آنتی بادی های کلاژن نوع I (1:400) انکوبه شدند (sc-59772; Santa Cruz Biotechnology, Inc., Santa Cruz, CA, USA)، کلاژن نوع III (1:600) (ab6310; Abcam, Inc., Cambridge, MA, USA) و الاستین کل (1: 300) (E4013; Sigma-Aldrich Corp.). بافت ها با استفاده از آنتی بادی ثانویه بیوتینیله (1: 200) (PK-6102؛ Vector Laboratories, Inc., Burlingame, CA, USA)، معرف ABC (Vectastain Elite ABC Peroxidase Kits Mouse, PK-6102;

رنگ آمیزی ایمونوفلورسانس غیرمستقیم (IF) برای تشخیص کلاژن نوع VII و تروپولاستین استفاده شد. پس از بازیابی آنتی ژن و مسدود کردن، نمونه ها با آنتی بادی های کلاژن نوع VII (1: 600) (sc-33710؛ Santa Cruz Biotechnology, Inc.)، آنتی بادی ثانویه Alexa Fluor® بز ضد موش IgG 594 (1: 400) انکوبه شدند (1:400) Molecular Probes, Inc., Eugene, OR, USA) و دی هیدروکلراید 4’،6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) (1: 1000) (D8417; Sigma-Aldrich Corp.) برای رنگ آمیزی هسته ای.

سیستم میکروپروب (FD-188-10A؛ Fisher Thermo Scientific, Inc.) برای تشخیص تروپولاستین با استفاده از معرف های بدست آمده از Open Biosystems, Inc. (Huntsville, AL, USA) همانطور که قبلاً توضیح داده شد استفاده شد. آنتی بادی مورد استفاده تروپولاستین GA317 (1: 400) (Elastin Products Co. Inc., Owensville, MO, USA) و Alexa Fluor® بز ضد خرگوش IgG 594 (1:400) (Molecular Probes, Inc.). بافت ها با DAPI به مدت 1-2 دقیقه انکوبه شدند.